Solución tampón

El pH es un factor importante en el funcionamiento de la cromatografía de intercambio iónico, y la estabilización y los cambios del pH generalmente se logran con tampones, por lo que la elección del tampón es un factor importante que afecta la separación.

Al seleccionar un tampón, el pH y la fuerza iónica son dos factores clave que afectan no solo la separación del producto objetivo de las impurezas, sino también el rendimiento del producto. El pH elegido depende del punto isoeléctrico, la estabilidad y la solubilidad del producto objetivo, no solo para que el material separado sea un ion que pueda intercambiarse, sino también para mantener su alta actividad. También debe considerarse el valor de pKa del intercambiador iónico.

Dado que el propio buffer está cargado, también se combina con el  medio de cromatografía de intercambio iónico Esta combinación causará dos tipos de interferencia: por un lado, reduce la concentración del tampón, lo que reduce la capacidad tampón; por otro, se intercambia con el medio de separación para competir con la proteína por la capacidad de intercambio del medio. Por lo tanto, al utilizar medios de cromatografía de intercambio aniónico, evite usar tampones con carga negativa, como el fosfato. Al utilizar medios de cromatografía de intercambio catiónico, evite usar tampones con carga positiva, como el Tris.

Debido a los diferentes tipos de medios de separación, el proceso inicial varía ligeramente. En circunstancias normales, al utilizar medios de cromatografía de intercambio aniónico, el tampón inicial tiene un pH entre 0,5 y 1, superior al punto isoeléctrico de la proteína diana; al utilizar una capa de intercambio catiónico, al analizar el medio, el tampón inicial tiene un pH entre 0,5 y 1, inferior al punto isoeléctrico de la proteína diana.