Solución tampón

El pH es un factor importante en el funcionamiento de la cromatografía de intercambio iónico, y la estabilización y los cambios del pH generalmente se logran con tampones, por lo que la elección del tampón es un factor importante que afecta la separación.

Al seleccionar un tampón, el pH y la fuerza iónica son dos factores clave que afectan no sólo la separación del producto objetivo de las impurezas, sino también el rendimiento del producto. El pH elegido depende del punto isoeléctrico, la estabilidad y la solubilidad del producto objetivo, no sólo para hacer del material separado un ión que pueda intercambiarse, sino también para mantener su alta actividad. También se debe considerar el valor pK del intercambiador de iones.

Dado que el buffer en sí está cargado, también se combina con el  medio de cromatografía de intercambio iónico . Esta combinación provocará dos tipos de interferencias, por un lado, reducir la concentración del tampón, reduciendo así la capacidad tampón; por otro lado, se intercambia con el medio de separación para competir con la proteína por la capacidad de intercambio del medio. Por lo tanto, cuando utilice medios de cromatografía de intercambio aniónico, evite el uso de tampones cargados negativamente como el fosfato. Cuando utilice medios de cromatografía de intercambio catiónico, evite el uso de tampones cargados positivamente como Tris.

Debido a los diferentes tipos de medios de separación, el proceso inicial es ligeramente diferente. En circunstancias normales, cuando se utilizan medios de cromatografía de intercambio aniónico, el tampón inicial es superior al punto isoeléctrico de la proteína objetivo en un pH de 0,5 a 1; utilizando una capa de intercambio catiónico Cuando se analiza el medio, el tampón inicial es inferior al punto isoeléctrico de la proteína objetivo en un pH de 0,5 a 1.