Elución y regeneración

Cuando se agote el medio cromatográfico se deberá eluir. El principio básico es desorber el producto objetivo mediante un ion o grupo más activo. Los diferentes sorbentes difieren en su actividad. Por lo tanto, se debe seleccionar un eluyente adecuado para eluir la proteína de  medios de cromatografía .

Hay aproximadamente tres formas de eluir la cromatografía de intercambio iónico:
Uno es para elución simultánea. El eluyente es un ácido diluido, se puede usar un álcali o una solución salina, y también se puede usar un disolvente orgánico apropiado, en donde se usa principalmente la solución salina, y la forma de dosificación de acuerdo con la naturaleza del producto objetivo y el producto final es seleccionado. Dado que la sustancia que se va a absorber a menudo no es una sola especie, la carga de cada sustancia es diferente y la fuerza de unión al medio es diferente. Incluso si se utiliza el mismo eluyente, la sustancia fácilmente reemplazable fluirá primero fuera del medio y la fuerza de unión es fuerte. Una vez descargado el material, siempre que se recoja mediante fraccionamiento, se pueden separar varias sustancias para obtener un producto relativamente puro. Este método se utiliza a menudo para la separación cuando se comprende bien el rendimiento del producto objetivo o para la separación de especies analíticas.

La segunda es una elución por etapas, es decir, una elución con diferentes concentraciones de solución salina. Medio de separación Durante el proceso de adsorción por intercambio, se adsorben una variedad de proteínas. Si se utiliza una condición de elución constante, a veces no es posible separar adecuadamente todos los componentes y es necesario cambiar las condiciones de elución. Puede ser un cambio gradual, es decir, se usan diferentes eluyentes o eluyentes con diferentes valores de pH para la elución en etapas, y se pueden obtener diferentes picos de elución según diferentes concentraciones de eluyentes y diferentes acidez. Es decir, una concentración de sal puede obtener una proteína diana y diferentes concentraciones de sal pueden obtener diferentes proteínas diana. Este método de elución paso a paso es adecuado para la separación de proteínas de naturaleza conocida, especialmente para producción a escala, fácil de operar y fácil de controlar.

El tercer tipo es una elución en gradiente continuo, es decir, cambiar la fuerza iónica o el pH del eluido de acuerdo con un cierto cambio lineal (generalmente solo en un caso especial que utiliza un método de elución que cambia el pH), en el proceso de clasificación del eluyente. En el proceso, se reemplazan diferentes proteínas una por una para obtener varios componentes proteicos y, al mismo tiempo, las proteínas generalmente no tienen cola. La elución en gradiente es el método de elución más utilizado en la cromatografía de intercambio iónico y también es el método de elución con la capacidad de elución más fuerte, que es adecuado para la elución de componentes similares con propiedades de carga similares.

En el proceso de elución, se puede utilizar elución paralela o elución contracorriente. La elución en paralelo también se llama elución directa, es decir, la dirección del flujo del eluyente es la misma que la dirección del flujo del fluido de trabajo, y la elución en contracorriente también se llama. Para la elución inversa, la dirección del flujo del eluyente es opuesta. a la dirección del flujo del fluido de trabajo. Si el líquido de alimentación se intercambia y se adsorbe de arriba a abajo a través de la columna de intercambio, la concentración del adsorbato en la capa superior de la columna de intercambio es mayor que la de la capa inferior, y la desorción inversa del eluato de la de abajo hacia arriba puede lograr el propósito de elución de manera más eficiente. Sin embargo, dado que la operación de elución inversa es mucho más complicada que la elución directa, se basa principalmente en la elución positiva.

El caudal del eluyente también afecta la separación de la cromatografía de intercambio iónico y el caudal de elución normalmente se mantiene constante. En general, la resolución de la elución lenta es mejor que la de la elución rápida, pero la velocidad de elución es demasiado lenta, lo que provocará un tiempo de separación prolongado, efectos secundarios como difusión de la muestra, ampliación del pico del espectro y resolución reducida, por lo que depende sobre la situación real. Elija la tasa de elución adecuada. Si los picos de elución están relativamente concentrados en un área determinada para causar superposición, el rango de gradiente debe reducirse adecuadamente o la velocidad de elución debe reducirse para aumentar la resolución. Si la resolución es buena, pero el pico de elución es demasiado amplio, la velocidad de elución debe aumentarse adecuadamente.