Elución y regeneración

Cuando el medio cromatográfico se agota, debe eluirse. El principio básico es desorber el producto objetivo mediante un ion o grupo más activo. Los diferentes sorbentes difieren en su actividad. Por lo tanto, se debe seleccionar un eluyente adecuado para eluir la proteína.  medios de cromatografía .

Existen aproximadamente tres formas de eluir la cromatografía de intercambio iónico:
Uno es para la elución simultánea. El eluyente es un ácido diluido, se puede utilizar una solución alcalina o salina, y también se puede utilizar un disolvente orgánico apropiado, donde la solución salina se utiliza principalmente, y la forma de dosificación de acuerdo con la naturaleza del producto objetivo y se selecciona el producto final. Dado que la sustancia a ser absorbida a menudo no es una sola especie, la carga de cada sustancia es diferente, y la fuerza de unión al medio es diferente. Incluso si se utiliza el mismo eluyente, la sustancia fácilmente reemplazable fluirá primero del medio, y la fuerza de unión es fuerte. Después de que el material se descarga, siempre que se recoja por fraccionamiento, se pueden separar varias sustancias para obtener un producto relativamente puro. Este método se utiliza a menudo para la separación cuando el rendimiento del producto objetivo es bien conocido, o para la separación de especies analíticas.

El segundo es una elución por pasos, es decir, la elución con diferentes concentraciones de solución salina. Medio de separación Durante el proceso de adsorción de intercambio, se adsorben diversas proteínas. Si se utiliza una condición de elución constante, a veces no es posible separar adecuadamente todos los componentes y es necesario cambiar las condiciones de elución. Puede ser un cambio por pasos, es decir, se utilizan diferentes eluyentes o eluyentes con diferentes valores de pH para la elución en etapas, y se pueden obtener diferentes picos de elución según las diferentes concentraciones de eluyentes y las diferentes acideces. Es decir, una concentración de sal puede obtener una proteína diana, y diferentes concentraciones de sal pueden obtener diferentes proteínas diana. Este método de elución paso a paso es adecuado para la separación de proteínas de naturaleza conocida, especialmente para la producción a escala, fácil de operar y fácil de controlar.

El tercer tipo es una elución de gradiente continuo, es decir, cambiando la fuerza iónica o el pH del eluido de acuerdo con un cierto cambio lineal (generalmente solo en un caso especial utilizando un método de elución que cambia el pH), en el proceso de clasificación del eluyente. En el proceso, diferentes proteínas se reemplazan una por una para obtener varios componentes proteicos, y al mismo tiempo, las proteínas generalmente no tienen cola. La elución de gradiente es el método de elución más comúnmente utilizado en cromatografía de intercambio iónico, y también es el método de elución con la capacidad de elución más fuerte, que es adecuado para la elución de componentes similares con propiedades de carga similares.

En el proceso de elución, se puede utilizar la elución en paralelo o en contracorriente. La elución en paralelo también se denomina elución directa, es decir, la dirección de flujo del eluyente es la misma que la dirección de flujo del fluido de trabajo, y la elución en contracorriente también se denomina Para la elución inversa, la dirección de flujo del eluyente es opuesta a la dirección de flujo del fluido de trabajo. Si el líquido de alimentación se intercambia y se adsorbe de arriba a abajo a través de la columna de intercambio, la concentración del adsorbato en la capa superior de la columna de intercambio es mayor que la de la capa inferior, y la desorción inversa del eluido de abajo a arriba puede lograr el propósito de la elución de manera más eficiente. Sin embargo, dado que la operación de elución inversa es mucho más complicada que la elución directa, se basa principalmente en la elución positiva.

El caudal del eluyente también afecta la separación de la cromatografía de intercambio iónico, y la velocidad de elución suele mantenerse constante. En general, la resolución de la elución lenta es mejor que la de la elución rápida, pero una velocidad de elución demasiado lenta provocará un tiempo de separación prolongado, efectos secundarios como la difusión de la muestra, la ampliación del pico del espectro y una resolución reducida; por lo tanto, depende de la situación real. Seleccione la velocidad de elución adecuada. Si los picos de elución están relativamente concentrados en un área determinada y provocan solapamiento, el rango del gradiente debe reducirse adecuadamente o la velocidad de elución debe disminuirse para aumentar la resolución. Si la resolución es buena, pero el pico de elución es demasiado amplio, la velocidad de elución debe aumentarse adecuadamente.