El pH es un factor importante en la operación de la cromatografía de intercambio iónico, y la estabilización y los cambios del pH se logran generalmente con tampones, por lo que la elección del tampón es un factor importante que afecta la separación.
Al seleccionar un tampón, el pH y la fuerza iónica son dos factores clave que afectan no solo la separación del producto objetivo de las impurezas, sino también el rendimiento del producto. El pH elegido depende del punto isoeléctrico, la estabilidad y la solubilidad del producto objetivo, no solo para hacer del material separado un ión que pueda intercambiarse, sino también para mantener su alta actividad. También se debe considerar el valor de pK del intercambiador de iones.
Dado que el búfer en sí está cargado, también se combina con elmedio de cromatografía de intercambio iónico. Esta combinación provocará dos tipos de interferencias, por un lado, reduciendo la concentración del búfer, reduciendo así la capacidad de almacenamiento; por otro lado, se intercambia con el medio de separación para competir con la proteína por la capacidad de intercambio del medio. Por lo tanto, cuando utilice medios de cromatografía de intercambio aniónico, evite el uso de tampones cargados negativamente como el fosfato. Cuando utilice medios de cromatografía de intercambio catiónico, evite utilizar tampones cargados positivamente como Tris.
Debido a los diferentes tipos de medios de separación, el proceso inicial es ligeramente diferente. En circunstancias normales, cuando se utilizan medios de cromatografía de intercambio aniónico, el tampón inicial es más alto que el punto isoeléctrico de la proteína diana en un pH de 0,5-1; usando una capa de intercambio catiónico Cuando se analiza el medio, el tampón de partida es menor que el punto isoeléctrico de la proteína diana en 0.5 a 1 pH.
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