SP Seplife® FF

Resina de cromatografía de agarosa

SP seplife FF

Perfil del producto:
SP seplife® FFresina de cromatografíaes un nuevo altamente reticuladoresina de cromatografía de agarosadesarrollado independientemente por Sunresin. Es una especie de propilo a base de ácido sulfónico unido aresina de cromatografía de filtración en gel de agarosa. Resina de cromatografía de intercambio catiónico fuerte con alto caudal, baja contrapresión, alta carga dinámica, buena estabilidad química y propiedades mecánicas, baja adsorción no específica, alta tasa de recuperación, escalado conveniente, acortando el tiempo de producción y mejorando la productividad. Es ampliamente utilizado enseparación de proteínas por intercambio iónico,ácidos nucleicosypéptidosaguas abajo debiofarmacéuticos y bioingeniería.

Parámetros de resina:

Instrucción de prueba:
1.Embalaje de columna
El embalaje se realiza de acuerdo con los procedimientos operativos estándar. Debe asegurarse que cada material esté a la temperatura de funcionamiento y que el gel deba desgasificarse antes de envasarse.
2.Equilibrio
Equilibre la columna con 2 a 5 volúmenes de columna del balance de carga, asegurándose de que la conductividad y el pH del efluente sean exactamente iguales a la conductividad y el pH del tampón de carga.
La solución de equilibrio es una solución tampón de baja concentración, como NaOAC, PBS y similares. Una solución de equilibrio comúnmente utilizada es tampón acetato 0,1 mol / L, pH 5,0.
Carga 3.Sample
(1) La muestra se prepara con una solución de equilibrio y la muestra turbia se centrifuga y filtra para su carga. Las muestras con demasiada concentración de sal se procesan y luego se dispensan.
(2) En general, el producto objetivo se combina en una columna, las impurezas se lavan con una solución de equilibrio y se selecciona un eluyente para lavar el producto objetivo.
(3) La medida en que el medio adsorbe los componentes de la muestra depende de la naturaleza cargada de la muestra, la fuerza iónica de la fase móvil y el pH. La concentración de sal es pequeña y el medio se adsorbe a los componentes de la muestra con más firmeza. Cuando se utilizan medios de cromatografía SP, el pH recomendado es 1 unidad por encima del punto isoeléctrico del producto objetivo.
4 elución
La elución se puede llevar a cabo aumentando la concentración de sal o aumentando el pH, y generalmente aumentando la concentración de sal. Un eluyente de uso común (solución B) tal como: tampón acetato 0,1 mol / L + NaCl 2 mol / L, pH 5,0.
5.Regeneración
Generalmente, el tampón se lava con una alta concentración de sal (que contiene 1 ~ 2 mol / L de NaCl) o el pH se reduce 10 veces o más, y luego se lava con una solución de equilibrio de la proteína unida para equilibrar.
Si las proteínas o los lípidos inactivados no se eliminan durante la regeneración, pueden eliminarse mediante limpieza in situ (CIP).
6.CIP
(1) Para las proteínas unidas por enlaces iónicos, se puede eliminar con un volumen de lecho de columna de 0,5 a 1 de NaCl 2 M.
(2) Para proteínas precipitadas, proteínas o lípidos unidos hidrofóbicamente, se puede lavar primero con un volumen de lecho de columna de NaOH 0,1 M y luego con una solución tampón de equilibrio hasta que el pH sea neutro.
(3) Para proteínas, lípidos, etc. fuertemente unidos hidrofóbicamente, lavar con 4 a 10 veces el volumen del lecho de etanol al 70% o isopropanol al 30%. Tenga en cuenta que la concentración del solvente orgánico aumenta gradualmente en forma de gradiente, de lo contrario es fácil crear burbujas.
7.Almacenamiento
Sellado y almacenado a 4 ~ 30 ℃ (la solución de conservación es etanol al 20% + acetato de sodio 0,2 mol / L), lugar seco, ventilado, limpio, no se puede congelar;
La columna usada se almacena a 4 ~ 8 ℃, solución de etanol al 20% + acetato de sodio 0,2 mol / L.

Precaución:
(1) Selección de columna: teóricamente, siempre que la columna sea lo suficientemente larga, se puede obtener la resolución ideal, pero dado que el caudal de la columna está relacionado con el gradiente de presión, la longitud de la columna aumenta para ralentizar el caudal, el pico se vuelve más amplia, y la resolución Disminuir; el diámetro de la columna aumenta, provocando un aumento de la falta de uniformidad del flujo de líquido y una disminución significativa de la resolución.
(2) El pH y la fuerza iónica del tampón de elución deben controlarse estrictamente durante el proceso de purificación. La cromatografía en columna debe realizarse después de la muestra y el medio de cromatografía SP debe estar completamente equilibrado con el tampón de elución.
(3) El lecho de la columna debe ser plano, sin ranuras ni burbujas de aire; de ​​lo contrario, debe reembalarse.
(4) El caudal debe controlarse estrictamente durante el proceso de elución y no demasiado rápido.
(5) El volumen de la muestra debe ser pequeño y la concentración no debe ser demasiado alta.
(6) Durante la carga y todo el proceso de elución, se evita que la superficie del cilindro se seque.