Resina de cromatografía de agarosa.
SP Splife FF
SP SEPLIFE® FF CROMAGRAFÍA DE AGAROSA RESINA DE PROFEGE DEL PRODUCTO:
SP SEPLIFE® FF resina de cromatografía es un nuevo altamente reticulado Resina de cromatografía de agarosa. Desarrollado de forma independiente por Sunresin. Es un tipo de propilo de ácido sulfónico. Resina de cromatografía de filtración de gel de agarosa. Resina de cromatografía de intercambio de catión fuerte Con un alto caudal, presión de espalda baja, carga dinámica alta, buena estabilidad química y propiedades mecánicas, baja adsorción no específica, alta tasa de recuperación, escala conveniente, acortando tiempo de producción y mejora de la productividad. Se usa ampliamente en Separación de intercambio iones de proteínas., ácidos nucleicos y péptidos corriente abajo de Biofarmacéuticos y bioingeniería..
Parámetros de resina de cromatografía de agarosa SP SEPLIFE® FF:
| Código de resina | SP SEPLIFE® FF |
| Apariencia | Cuentas de esfera blanca |
| Tamaño de partícula (μm) | 45 ~ 165 |
| Matriz | Sleplife 6ff |
| Caudal (cm / h) | <750 |
| Presión (MPA) | 0.3 |
| Resistencia al calor | 121 ℃, en agua durante 30 minutos. |
| estabilidad de pH | 4 ~ 13 (largo plazo), 3 ~ 14 (a corto plazo, CIP) |
| Solicitud | Proteínas, ácidos nucleicos y péptidos río abajo.
De biofarmacéuticos y bioingeniería. |
| Estabilidad química | Estable en los siguientes líquidos: todos los buffers acuosos comunes;
1 mol / l hidróxido de sodio; 8 mol / l urea; 8 mol / l clorhidrato de guanidina; 70% de etanol |
| Adsorción (mg / ml) | > 55mg / ml lisozyme / ml |
| Capacidad de intercambio de iones | 0.18 ~ 0.25mmol / ml |
| Temp. | 4 ~ 40 ℃ |
Condiciónes de la prueba: Columna de cromatografía 16mm * 300mm; Altura de la cama de columna 15 cm; temperatura 25;
La fase móvil fue de 0.1 mol / L NaCl. |
SP Seplife® FF Cromatografía de agarosa resinaInstrucción de prueba:
1. Embalaje de columna
El embalaje se realiza de acuerdo con los procedimientos operativos estándar. Debe asegurarse de que cada material esté a la temperatura de funcionamiento y que el gel debe desgasificarse antes de que esté envasado.
2.equilibrio
Equilibre la columna con volúmenes de 2 a 5 columnas del balance de carga, asegurándose de que la conductividad y el pH del efluente sean exactamente iguales a la conductividad y el pH del búfer de carga.
La solución de balance es una solución de búfer de baja concentración, como NAOAC, PBS y similares. Una solución de equilibrio de uso común es un tampón de acetato de 0,1 mol / L, pH 5.0.
3.Sample cargando
(1) La muestra se prepara con una solución de balance, y la muestra turbia se centrifuga y se filtra para la carga. Las muestras con demasiada concentración de sal se procesan y luego se dispensan.
(2) En general, el producto objetivo se combina en una columna, las impurezas se lavan con una solución de equilibrio, y se selecciona un eluyente para lavar el producto objetivo.
(3) la medida en que el medio adsorbe los componentes de la muestra depende de la naturaleza cargada de la muestra, la resistencia iónica de la fase móvil y el pH. La concentración de sal es pequeña, y los adsorbizos medios a los componentes de la muestra son más firmemente. Al usar medios de cromatografía SP, el pH recomendado es 1 unidad por encima del punto isoeléctrico del producto objetivo.
4.Alución
La elución puede llevarse a cabo aumentando la concentración de sal o aumentando el pH, y en general aumenta la concentración de sal. Un eluyente comúnmente utilizado (solución B), tales como: tampón de acetato de 0,1 mol / l + 2 mol / l NaCl, pH 5.0.
5.Regeneración
En general, el tampón se lava con una alta concentración de sal (que contiene 1 ~ 2mol / l NaCl) o el pH se reduce en 10 veces o más, y luego se lava con una solución de equilibrio de la proteína unida al equilibrio.
Si las proteínas o lípidos inactivados no se lavan durante la regeneración, se pueden eliminar por la limpieza en el lugar (CIP).
6.cip
(1) Para las proteínas unidas por la unión iónica, se puede eliminar con volumen de lecho de 0.5 a 1 columna de 2 m NaCl.
(2) Para proteínas precipitadas, proteínas o lípidos vinculados hidrófobamente, se puede lavar primero con volumen de 1 cama de columna de NaOH 0,1 M, y luego con una solución de tampón de equilibrio hasta que el pH sea neutral.
(3) Para proteínas, lípidos, etc. fuertemente hidrofóbicamente, lavar con 4 a 10 veces el volumen de la cama de etanol al 70% o al 30% de isopropanol. Tenga en cuenta que la concentración del disolvente orgánico aumenta gradualmente de manera gradiente, de lo contrario, es fácil crear burbujas.
7. almacenaje
Sellado y almacenado a 4 ~ 30 ℃ (la solución de conservación es 20% de etanol + 0.2mol / L acetato de sodio), un lugar seco, ventilado, limpio, no se puede congelar;
La columna usada se almacena a 4 ~ 8 ℃, una solución de etanol al 20% + acetato de sodio de 0.2mol / l.
SP Seplife® FF Cromatografía de agarosa resinaPrecaución:
(1) Selección de columna: teóricamente, siempre que la columna sea lo suficientemente larga, la resolución ideal se puede obtener, pero como la velocidad de flujo de la columna está relacionada con el gradiente de presión, la longitud de la columna aumenta para retardar el caudal, el pico se convierte en más amplio, y la resolución disminuye; El diámetro de la columna aumenta, causando un aumento en la no uniformidad del flujo de líquido y una disminución significativa en la resolución.
(2) El pH y la resistencia iónica del tampón de elución deben controlarse estrictamente durante el proceso de purificación. La cromatografía en columna debe realizarse después de la muestra y el medio de cromatografía SP debe estar equilibrada a fondo con el tampón de elución.
(3) El lecho de la columna debe ser plano, sin ranuras y burbujas de aire, de lo contrario, debe ser reenvasado.
(4) El caudal debe controlarse estrictamente durante el proceso de elución, y no demasiado rápido.
(5) El volumen de la muestra debe ser pequeño y la concentración no debe ser demasiado alta.
(6) Durante la carga y todo el proceso de elución, se evita que la superficie del cilindro se seque.
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