Resina de cromatografía de agarosa
SP SEPLIFE FF
SP SEPLIFE® FF Agarose Cromatografía Perfil de productos de resina:
SP SEPLIFE® FF resina de cromatografía es un nuevo altamente reticulado resina de cromatografía de agarosa desarrollado independientemente por Sunresin. Es una especie de propilo a base de ácido sulfónico unido resina de cromatografía de filtración de gel de agarosa. Resina de cromatografía de intercambio de cationes fuertes con alta velocidad de flujo, baja presión de la espalda, alta carga dinámica, buena estabilidad química y propiedades mecánicas, baja adsorción no específica, alta tasa de recuperación, escala conveniente, acortamiento del tiempo de producción y mejora de la productividad. Se usa ampliamente en separación de intercambio iónico de proteínas, ácidos nucleicos y péptidos río abajo de biofarmacéuticos y bioingeniería.
SP SEPLIFE® FF Agarose cromatografía Parámetros de resina:
| Código de resina | SP SEPLIFE® FF |
| Apariencia | Cuentas de la esfera blanca |
| Tamaño de partícula (μm) | 45 ～ 165 |
| Matriz | SePlife 6ff |
| Caudal (cm/h) | <750 |
| Presión (MPA) | 0.3 |
| Resistencia al calor | 121 ℃, en agua durante 30 minutos |
| estabilidad de pH | 4 ~ 13 (a largo plazo), 3 ~ 14 (a corto plazo, CIP) |
| Solicitud | Proteínas, ácidos nucleicos y péptidos aguas abajo
de biofarmacéuticos y bioingeniería |
| Estabilidad química | Estable en los siguientes líquidos: todos los amortiguadores acuosos comunes;
1 mol/l hidróxido de sodio; 8 mol/l de urea; 8 mol/l de clorhidrato de guanidina; 70% de etanol |
| Adsorción (mg / ml) | > 55mg/ml de lisozima/ml |
| Capacidad de intercambio iónico | 0.18 ～ 0.25 mmol /ml |
| Temperadora de trabajo. | 4 ~ 40 ℃ |
Condiciónes de la prueba: Columna de cromatografía 16 mm * 300 mm; Altura de la cama de columna 15 cm; temperatura 25 ℃;
La fase móvil fue de 0.1 mol / L NaCl. |
SP SEPLIFE® FF Agarose cromatografía resina Instrucción de prueba:
1. Embalaje de columna
El embalaje se realiza de acuerdo con los procedimientos operativos estándar. Debe asegurarse de que cada material esté a la temperatura de funcionamiento y que el gel debe desgasificarse antes de empacarlo.
2.Equilibro
Equilibrar la columna con 2 a 5 volúmenes de columna del balance de carga, asegurándose de que la conductividad y el pH del efluente sean exactamente los mismos que la conductividad y el pH del tampón de carga.
La solución de equilibrio es una solución de tampón de baja concentración como NAOAC, PBS y similares. Una solución de balance comúnmente utilizada es el tampón de acetato de 0.1 mol/L, pH 5.0.
3. Carga de muestra
(1) La muestra se prepara con una solución de equilibrio, y la muestra turbia se centrifuge y se filtra para la carga. Las muestras con demasiada concentración de sal se procesan y luego se dispensan.
(2) En general, el producto objetivo se combina en una columna, las impurezas se eliminan con una solución de equilibrio y se selecciona un eluyente para lavar el producto objetivo.
(3) La medida en que el medio adsorbe los componentes de la muestra depende de la naturaleza cargada de la muestra, la resistencia iónica de la fase móvil y el pH. La concentración de sal es pequeña y el medio adsorbe a los componentes de la muestra más firmemente. Cuando se usa medios de cromatografía SP, el pH recomendado está 1 unidad por encima del punto isoeléctrico del producto objetivo.
4.Elución
La elución se puede llevar a cabo aumentando la concentración de sal o aumentando el pH, y generalmente aumentando la concentración de sal. Un eluente (solución B) comúnmente utilizado como: tampón de acetato de 0.1 mol/L + 2 mol/L NaCl, pH 5.0.
5. Regeneración
En general, el tampón se lava con una alta concentración de sal (que contiene 1 ~ 2mol/L NaCl) o el pH se reduce en 10 veces o más, y luego se lava con una solución de equilibrio de la proteína unida para equilibrarse.
Si no se eliminan las proteínas o lípidos inactivados durante la regeneración, se pueden eliminar mediante la limpieza en el lugar (CIP).
6.cip
(1) Para las proteínas unidas por la unión iónica, se puede eliminar con un volumen de lecho de 0.5 a 1 columna de 2 M NaCl.
(2) Para las proteínas precipitadas, proteínas o lípidos unidos hidrófobicamente, se puede lavar primero con un volumen de lecho de 1 columna de NaOH 0.1 M, y luego con una solución tampón de equilibrio hasta que el pH sea neutral.
(3) Para proteínas, lípidos, etc. unidas fuertemente hidrofóbicamente, lave con 4 a 10 veces el volumen de lecho de etanol al 70% o al 30% de isopropanol. Tenga en cuenta que la concentración del solvente orgánico aumenta gradualmente de manera gradiente, de lo contrario es fácil crear burbujas.
7.macenaje
Sellado y almacenado a 4 ~ 30 ℃ (la solución de preservación es al 20% de etanol + 0.2mol/L acetato de sodio), no se puede congelar;
La columna usada se almacena a 4 ~ 8 ℃, solución de etanol al 20% +0.2mol /L acetato de sodio.
SP SEPLIFE® FF Agarose cromatografía resina Precaución:
(1) Selección de columna: teóricamente, siempre que la columna sea lo suficientemente larga, se puede obtener la resolución ideal, pero dado que la velocidad de flujo de la columna está relacionada con el gradiente de presión, la longitud de la columna aumenta para ralentizar el caudal, el pico se convierte en más ancho, y la resolución disminuye; El diámetro de la columna aumenta, causando un aumento en la no uniformidad del flujo de líquido y una disminución significativa en la resolución.
(2) El pH y la fuerza iónica del tampón de elución deben controlarse estrictamente durante el proceso de purificación. La cromatografía de la columna debe realizarse después de la muestra y el medio de cromatografía SP debe equilibrarse completamente con el tampón de elución.
(3) El lecho de la columna debe ser plano, sin ranuras y burbujas de aire, de lo contrario, debe volver a empaquetarse.
(4) El caudal debe controlarse estrictamente durante el proceso de elución, y no demasiado rápido.
(5) El volumen de la muestra debe ser pequeño y la concentración no debe ser demasiado alta.
(6) Durante la carga y todo el proceso de elución, se evita que la superficie del cilindro se seque.
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