Níquel quelante quelante de cromatografía de agarosa resina
NI SEPLIFE 6FF (IDA) INSTRUCCIONES
NI SEPLIFE® 6FF (IDA) Affininity Media Chromatográfica Perfil del producto:
Ni quelante de cromatografía de agarosa. (IDA) es un ácido iminodiacético vinculante en medios de agarosa de 6FF y luego quelante de ION de NI2 + ser como Medios cromatográficos de afinidad. Se usa ampliamente para el Procesamiento de proteínas., ácido nucleico y Purificación de polipéptidos en la corriente de Biofarming y bioingeniería..
NI SEPLIFE® 6FF (IDA) Parámetros de resina de medios cromatográficos:
| Código de resina | NI SEPLIFE® 6FF (IDA) |
| Apariencia | Perlas de gel de esfera |
| Tamaño de partícula (μm) | 45 ~ 165 |
| Matriz | Sleplife 6ff |
| Caudal (cm / h) | ≥370 |
| Presión (MPA) | 0.3 |
| Capacidad de unión de iones | (NI2 + UMOL / ML): ~ 15 |
| Referencia de caudal lineal | 60 cm / h |
| estabilidad de pH | 3 ~ 13 (largo plazo), 2 ~ 14 (a corto plazo, CIP) |
| Solicitud | Purificación de proteínas de su etiqueta |
| Estabilidad química | Estable en solución de tampón de agua, 0.1mol / L NaOH; 0.01mol / l HCL;
8 mol / l carbamida |
NI SEPLIFE® 6FF (IDA) Instrucción de prueba de medios cromatográficos:
1. Embalaje de columna
(1) Todo el material y reactivo en temperatura ambiente, preparando el búfer inicial y la elución de BEFFER.
(2) Tome la muestra de resina según el tamaño de la columna, lave el 20% de etanol para secar, use un tampón (la relación de resina: tampón = 3: 1) para hacer un tratamiento de homogeneización y desgasificación.
(3) Use agua o tampón para mantenerse dentro o la parte inferior de la columna húmeda, el nivel de agua o tampón debe ser más alto que el mambrana del filtro y asegúrese de que la parte inferior de la columna sin Bobble.
(4) Use varilla de vidrio para guiar homogeneizar en columna junto con la cara interna de la columna una vez para evitar cualquier burbuja. Válvula de salida de columna abierta para que la resina se ajuste libremente, y conecte bien la tapa de la columna.
(5) Abra la bomba peristáltica, use tampón para pasar a través de la columna a la velocidad de flujo de 1.33 veces que el caudal de tampón normal usando. Utilice el búfer de 2-3bv para hacer balance de columna.
2.equilibrio
Balance con 2 ~ 5 volúmenes de cama de solución de tampón inicial hasta que la conductividad, el pH y otros parámetros no se modifiquen.
3.Sample cargando
(1) La muestra generalmente se disuelve en el tampón inicial de pH 6-8, y el aumento del pH del búfer de carga puede aumentar la carga.
(2) El búfer no debe contener EDTA y citrato, y es mejor evitar reducir agentes, como Mercaptoetanol y DTT.
(3) La solución de tampón comúnmente utilizada tiene una solución de tampón de fosfato de sodio de 10 a 100 mmol / l, una solución de búfer de 20 a 200 mmol / ltris-hcl.
(4) 0.15 a 0.5 mol / L de NaCl generalmente se agrega al tampón para eliminar el intercambio de iones.
(5) Cuando se usa un gel de agarosa de chelate de níquel por primera vez, se recomienda usar 50 mmol / l PBS (50 mmol / l Nah2PO4, 0,5 mol / l NaCl, pH 7,4) como tampón inicial.
4.Alución
La elución generalmente se divide en los siguientes métodos:
(1) Reducir la elución en pH: la mayoría de las proteínas se eluyerán a pH 6-4 (también a pH 3-4), y el tampón puede ser acetato de sodio, ácido cítrico y sistemas de tampón de fosfato.
(2) Elución competitiva: aumentando o aumentando linealmente la concentración de sustancias en competencia con afinidad a los iones metálicos (por ejemplo, 0-0.5 mol / l imidazol, 0-50 mmol / l histidina, 0-2 mol / l nh4cl).
(3) Agente quelante Elución: los agentes quelantes, como EDTA y EGTA pueden reaccionar con iones metálicos para hacer que la proteína eluya. Sin embargo, este método no puede separar diferentes proteínas y afecta la adsorción de proteínas, lo que resulta en la incapacidad de la proteína de fusión para colgar.
NI SEPLIFE® 6FF (IDA) DEFENCIADADOS DE AFFINITY COMENTARIOS COMENTARIOS:
(1) Cuando se usa por primera vez, si la concentración de imidazol requerida para la elución es incierta, se recomienda agregar 10mmol / L, 20mmol / L, 50mmol / L, 100mmol / L, 100 mmol / L, 100mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100 mmol / L, 100mmol / L, 100 mmol / L, 100mmol / L, 200mmol / L, 200mmol / L, 500 mmol / L, El búfer inicial. El imidazol se eluyó y se recogió de baja a alta, respectivamente, y los resultados eluidos se identificaron mediante electroforesis SDS-PAGE.
(2) El imidazol es alcalino, y el pH se ajusta con HCL después de que se prepara el búfer correspondiente.
(3) Bajar la elución del pH y eluyendo el agente de quelante hará que los iones metálicos se caigan, y los iones metálicos deben volver a seleccionarse antes del siguiente uso.
(4) Condicionalmente, se puede realizar una elución lineal de gradiente de imidazol para determinar las condiciones de elución preferidas.
Para los métodos de elución anteriores, se deben agregar 150 a 500 mmol / l de NaCl al búfer para eliminar el intercambio de iones.
5.Regeneración
(1) El gel debe ser desnudado y regenerado después del uso repetido o cuando sea necesario reemplazar los iones de metal quelados. Método de eliminación de níquel: en primer lugar, enjuague la columna con volúmenes de 5 a 10 litros de agua destilada, luego enjuague la columna con volúmenes de 5 a 10 litros de 100 mmol / l EDTA, y finalmente use volúmenes de 2 a 3 litros de lavados de NaCl de 2 a 3 mol / l. alejado de EDTA residual.
(2) La columna utilizada para varias veces generalmente debe limpiarse después de la eliminación de níquel. Método de limpieza: revertir la columna con NaOH de 0.1 ~ 1.0 mol / L, manténgalo a 50 cm / h durante 1 ~ 2 h, no solo puede eliminar las fuertes impurezas, sino también eliminar la fuente de calor.
(3) re-quelante iones metálicos después de la limpieza. Método de la quelación: En primer lugar, la columna después de la eliminación de níquel está completamente equilibrada con volúmenes de 2 a 5 litros de agua destilada, y luego se usa una solución de sal metálica de 0,1 a 0,3 mol / l para pasar de 5 a 10 litros volúmenes a los iones metálicos quelados. Enjuague con volúmenes de 5 a 10 litros de agua destilada para eliminar iones de metal sin callar.
6.cip
(1) Eliminación de proteínas adsorbidas por intercambio iónico: se lavaron volúmenes de 2 a 3 litros por una solución de NaCl de 2 mol / l.
(2) Eliminación de proteínas y lípidos hidrófobos fuertes, etc.: Se lavaron los volúmenes de 4 camas con el 70% de etanol o el 30% de isopropanol.
(3) Eliminación de proteínas precipitadas, proteína hidrófoba: paso de regeneración de gel de referencia.
7. almacenaje
Sellado y almacenado a 4 ~ 30 ° C (etanol 20% en solución de almacenamiento), seco, ventilado, limpio, no congelado; Las columnas usadas se almacenan en 4 ~ 8 ° C, solución de etanol al 20%.
Precaución:
(1) La muestra y NI SEPLIFE®6FF (IDA) deben ser equilibrado con el tampón de elución y luego ir a la columna de cromatografía.
(2) El lecho de la columna debe ser plano, libre de ranuras y burbujas de aire, de lo contrario, debe ser reinstalado.
(3) Cuando se usa, asegúrese de que la temperatura de la columna y el búfer sean iguales, evitando la generación de burbujas en la cama de columna y que afecte el efecto de purificación.
(4) El caudal debe controlarse estrictamente durante el proceso de elución, y no demasiado rápido.
(5) Durante la carga y todo el proceso de elución, se evita que la superficie del cilindro se seque.
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